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2021-08-11

細胞凋亡（apoptosis）指為維持內環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。下面介紹幾種常用的檢測細胞凋亡的方法。一、TUNEL法脫氧核糖核苷酸衍生物digoxin在TdT酶的作用下，可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端，與dATP形成異多聚體，并可與連接了...

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細胞周期的分析

2021-08-11

細胞周期（cellcycle）是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經(jīng)歷的全過程，分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。細胞分裂期又稱M期。細胞通過M期一分為二，有的可繼續(xù)分裂進行周期循環(huán)，有的轉入G0期。G0期是脫離細胞周期暫時停止分裂的一個階段。但在一定適宜刺激下，又可進入周期（圖1），合成DNA與分裂。G0期的特點為：在未受刺激的G0細胞，DNA合成與細胞分裂的潛力仍然存在；當G0細胞...

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蛋白磷酸化檢測的注意事項

2021-08-02

1、樣本準備過程中防止蛋白質降解和保留翻譯后修飾樣本準備過程中，細胞會釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶，為了減少這些酶的活性，處理樣本的過程應在冰上進行，并預先冷卻所有緩沖液，并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇選擇磷酸化特異性抗體時，選擇所要檢測位點的磷酸化抗體至關重要。磷酸化都會使蛋白質的分子量增加80Da，檢查抗體是否檢測到磷酸化靶蛋白的分子量正確的條帶也很重要。3、誘導磷酸化課題設計可能需要在收獲前刺激細胞，以確保蛋白質被磷酸化。例如，在...

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Western blot之蛋白轉印二三事

2021-08-02

蛋白轉印的方法蛋白轉印可選擇傳統(tǒng)濕轉、半干轉或快速半干轉方法。濕轉系統(tǒng)：適用于大多數(shù)各種分子量的常規(guī)蛋白轉印。轉印過程中凝膠和膜被浸入充滿轉印緩沖液的槽中。半干轉系統(tǒng)：凝膠和膜被夾在預先潤濕緩沖液的濾紙之間，濾紙與平板電極直接接觸。半干轉系統(tǒng)的安裝使用比濕轉簡單。快速轉印系統(tǒng)：快速轉印系統(tǒng)是最近發(fā)展出來的技術，使用專用設備、專用濾紙及專用緩沖液來快速有效地轉印蛋白。通常濾紙和濕潤的膜預先放在一次性包裝中，簡化了轉印“三明治”的組裝。轉印緩沖液轉印緩沖液包含強導電性化學緩沖試劑...

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實驗室里的不明瓶瓶罐罐不要隨意洗?。?！

2021-07-30

中山大學藥學院于7月27日發(fā)布通報，該院2021年7月27日發(fā)生一起實驗安全事故，實驗=室在清理通風柜時發(fā)現(xiàn)之前畢業(yè)生遺留在燒瓶內的未知白色固體，一博士研究生用水沖洗時發(fā)生炸裂，炸裂產(chǎn)生的玻璃碎片刺破該生手臂動脈血管，送醫(yī)救治傷情得到控制，無生命危險。與實驗室負責老師溝通分析，導致炸裂的未知白色固體中可能含有氫化鈉或氫化鈣，遇水發(fā)生劇烈反應而炸裂。實驗室的瓶瓶罐罐清洗是科研工作者最日常的工作，但是，如果你并不確定瓶內裝的是什么東西，千萬不要隨意就拿去清洗！有些化學品遇水會發(fā)生...

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吃東西是為了饑餓還是為了享樂？原來它們的腦回路并不相同

2021-07-29

研究人員發(fā)現(xiàn)，盡管大腦通過中腦產(chǎn)生5-羥色胺的神經(jīng)元來調節(jié)快感和饑餓感的進食，但每種進食方式都是由自己獨立的電路連接的，不影響其他類型的進食方式。美國疾病控制與預防中心(CentersforDiseaseControlａndPrevention)的數(shù)據(jù)顯示，無論是由饑餓還是愉悅引起的暴飲暴食，通常都會導致肥胖。美國約42%的成年人都患有肥胖癥。一個由貝勒醫(yī)學院(BaylorCollegeofMedicine)的研究人員領導的國際研究小組在動物模型上研究了大腦是如何調節(jié)饑餓或其...

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重組DNA的構建（載體構建）

2021-07-29

基本原理：外源目的DNA與載體分子的連接稱為DNA重組，重組的DNA稱為重組體或重組子。研究中需要克隆或表達的基因為外源DNA，載體是指能夠攜帶外源基因進入受體細胞，并在其中進行擴增或誘導外源基因表達的工具，其中質粒載體最為常用。質粒是獨立于細菌染色體外具有自我復制的DNA分子。所有的質粒都有復制子、選擇性標志和多克隆位點3個共同的特性。質粒載體的選擇包括載體的大小、載體拷貝數(shù)、多接頭以及篩選插入片段的能力，pcDNA3.1（+/-）是比較常用的真核表達載體?；静襟E：1、目...

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